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NadPrep® DNA 甲基化亚硫酸氢盐转化模块

货号：

#1002701
#1002702

NadPrep® DNA Methyl Bisulfite Conversion Module 是基于亚硫酸氢盐转化原理针对 DNA 样本开发的甲基化转化试剂。该转化模块基于磁珠纯化的方案可在 2 hr 内将未甲基化的胞嘧啶高效转化为尿嘧啶，且利于自动化开展；同时可衔接纳昂达 NadPrep® 双链甲基化文库构建方案和 NadPrep® 单链甲基化文库构建方案，支持在多种类型的起始样本中灵活选择。

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亚硫酸氢盐转化流程

*接头连接产物示意图以 NadPrep® Methyl Stubby Adapter (UDI) 为例。

产品特色

兼容多类型样本且支持宽泛的投入量范围
胞嘧啶转化率高效稳定
卓越的 5mC 和 5hmC 检测灵敏度
操作便捷利于自动化开展

产品表现

文库产出及转化效率

图 1. 不同投入量样本的文库产出及转化效率。人类男性基因组 DNA 标准品 (Promega, G1471) 利用 NadPrep^® Methyl Library Preparation Module 搭配 NadPrep^® Methyl Stubby Adapter (UDI) Module (with 10 nt Index) 和 NadPrep^® DNA Methyl Bisulfite Conversion Module 构建文库，Illumina Novaseq 6000， PE 150 测序。A. 文库产出；B. 转化效率。

捕获表现

图 2. 不同甲基化水平样本的捕获表现。50 ng 不同甲基化水平的模拟样本利用 NadPrep^® Methyl Library Preparation Module 搭配 NadPrep^®Methyl Stubby Adapter (UDI) Module (with 10 nt Index) 经亚硫酸氢盐转化后构建文库，以甲基化 demo Panel (60 K) 进行杂交捕获，Illumina Novaseq 6000， PE 150 测序，On- target 按照 reads 数计算。A. 捕获数据比对率和中靶率；B. 靶区域覆盖度；C. Fold 80 base penalty；D. 去重后平均测序深度。

注：样本为人甲基化阳性对照 100% Methylated DNA (zymo, D5014-2) 和阴性对照 0% Methylated DNA (zymo, D5014-1)，经不同比例混合以模拟不同甲基化水平 (0%， 50% 和 100%)。Vendor Q* 和 Vendor Z* 分别为：Vendor Q* 和 Vendor Z* 亚硫酸氢盐转化模块。

甲基化水平准确率

图 3. 不同甲基化水平样本的甲基化靶向测序表现。A. 理论甲基化水平与实际检测到的甲基化水平的比较；B. 靶区域 CpG 甲基化水平。

包装编号	管盖颜色	组分名称	包装体积 1002701 (24 rxn)	包装体积 1002702 (96 rxn)
包装编号	管盖颜色	组分名称	包装体积 1002701 (24 rxn)	包装体积 1002702 (96 rxn)
Box 1	/	Bisulfite Diluent	4.5 mL	9 mL
		Bisulfite Mix	4×1 管	8×1 管
		Desulf Buffer	1.8 mL	7.5 mL
Box 2	/	Nuclease Free Water	2.5 mL	8 mL
	/	Bisulfite Beads	4.8 mL	3×6.2 mL
		DNA Protect Buffer	100 μL	380 μL

亚硫酸氢盐转化法 DNA 甲基化建库转化产物回收率偏低的原因是什么？

完整标题：亚硫酸氢盐转化法 DNA 甲基化建库转化产物回收率偏低的原因是什么？

可能原因	解决方案
起始投入量不准确	实际其实投入量偏低，建议使用 Qubit 进行精确定量
磁珠纯化过程中丢弃部分磁珠	采用涡旋混匀时，确保管盖紧闭，弃上清过程切勿丢弃磁珠

亚硫酸氢盐转化 DNA 甲基化建库转化不完全的原因？

完整标题：亚硫酸氢盐转化 DNA 甲基化建库转化不完全的原因？

可能原因	解决方案
转化后文库被未转化文库污染	使用带滤芯 Tips；转化结束后及时更换新的乳胶手套，更换新的工作台面以及新的移液器
Bisulfite Reagent 易发生氧化、结晶析出，导致亚硫酸盐溶液浓度降低，影响转化效率	在有效期以内使用 Bisulfite Reagent；控制 Bisulfite Reagent 暴露在空气中的时

类别	产品名称	详情	货号
BS 转化模块	NadPrep® DNA Methyl Bisulfite Conversion Module, 24 rxn	24 rxn	1002701
BS 转化模块	NadPrep® DNA Methyl Bisulfite Conversion Module, 96 rxn	96 rxn	1002702