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μCaler^®️ Total Solution for Methylation

货号：

#1105201
#1105202

μCaler^® 靶向甲基化测序全流程解决方案，搭载独家专利的 μCaler^® 液相杂交捕获系统，可在单日内完成全部流程，操作简单便捷。该解决方案捕获转化后的甲基化文库，采用专利型探针设计方案，可覆盖所有甲基化状态的靶标；此外，针对甲基化优化的杂交捕获体系，不仅适配于 mini Panel 的靶向富集，更适用于 AT-rich 等特殊区域的捕获。

μCaler® Hybrid Capture Reagents v2 是针对小 Panel 的靶向富集及多种类型的预文库的杂交捕获而优化设计，搭配 μCaler® NanoBlockers 及基于创新型方案设计的 μCaler® Panel 构成完整的液相杂交捕获体系，能够在单日内完成捕获文库构建的全流程。

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方案推荐

方案流程

方案特色

• 精准检测大规模 CpG 位点：一次性检测多种癌症的多个基因的 CpG 位点，实现精准联合检测
• 精确定量甲基化水平：高精度覆盖 0-100% 不同甲基化状态样本的精准定量
• 高速便捷操作：实验流程简化，操作便捷，单日内完成全部流程
• 稳定高效捕获：避免数据量不一致，确保捕获测序结果的稳定性，降低返工风险
• 更低测序成本：采用混杂模式，简化杂交捕获数量，降低测序成本，提升经济效益

方案表现

精准检测大规模 CpG 位点

图 1. 含不同规模 CpG 位点的定制 Panel 的 μCaler^® 靶向甲基化测序表现。人类基因组 DNA 标准品 (Promega, G1471) 利用 NadPrep^® Methyl Library Preparation Module 搭配 NadPrep^® Methyl Stubby Adapter (UDI) Module (with 10 nt Index) 和 NadPrep^® DNA Methyl Bisulfite Conversion Module 构建预文库，以 μCaler^® Methyl Cervical Cancer Panel (MCC) 和 μCaler^® Methyl Multiple Cancer Panel (MMC) 完成杂交捕获，Illumina^® Novaseq 6000，PE 150 测序，每个样本随机选取 1 Mb reads pair 用于数据分析。A. MCC 捕获表现；B. MCC CpG 位点的覆盖深度；C. MMC 捕获表现；D. MMC CpG 位点的覆盖深度。

注：MCC 覆盖区域约 1.4 Kb，包含 125 个 CpG 位点； MMC 覆盖区域约 3.6 Kb，包含 336 个 CpG 位点。

精确定量甲基化水平

图 2. 模拟样本经不同方法检测的甲基化水平。利用 50 ng 不同甲基化水平的模拟样本构建预文库，500 ng/预文库投入，以 MMC 完成杂交捕获。A-E. 分别为 0%，2%，10%，50% 和 100% 不同甲基化水平模拟样本的检测结果。
注：样本为人甲基化阳性对照 (Methylated DNA, Zymo, D5014-2) 与阴性对照 (Non-Methylated DNA, Zymo, D5014-1)，按不同比例混合以模拟不同甲基化水平。μCaler：μCaler^® 靶向甲基化测序； Pyro：焦磷酸测序。

高速便捷操作

稳定高效捕获

图 3. μCaler^® 靶向甲基化测序对小 Panel 的捕获表现。利用人类基因组 DNA 标准品 (Promega, G1471) 构建预文库，500 ng/预文库投入，分别以 MBT、MMC 和 MPC 完成杂交捕获。A. 捕获数据的比对率和中靶率；B. 靶区域 CpG 位点覆盖度；C. C 碱基的转化率；D. CpG 位点的甲基化水平。

注：MBT 覆盖区域约 1.2 Kb，包含 159 个 CpG 位点；MPC 覆盖区域约 6.2 Kb，包含 620 个 CpG 位点。

更低测序成本

图 4. 不同混合杂交方式下的 μCaler^® 靶向甲基化测序的捕获表现。利用人类基因组 DNA 标准品 (Promega, G1471) 构建预文库，500 ng/预文库投入，以 MCC 完成杂交捕获。A. 靶区域 CpG 位点覆盖度；B. CpG 位点的甲基化水平。

真实样本应用示例

图 5. 不同技术路线对临床真实样本的检测结果比较。 A. 高甲基化水平样本 (Tumor) 的检测结果；B. 低甲基化水平样本 (Normal) 的检测结果；C. 7 号染色体 (Chr 7) 相关 CpG 位点甲基化水平。
注：μCaler^® 靶向甲基化测序以 MBT 完成杂交捕获。

本产品仅限研究使用，不用于临床诊断。

甲基化建库模块

包装编号	管盖颜色	组分名称	包装体积 1002501 (24 rxn)	包装体积 1002502 (96 rxn)
Box1		EndRepair & A-Tailing Buffer	180 µL	690 µL
		End Repair & A-Tailing Enzyme	120 µL	460 µL
		Ligation Buffer	750 µL	2×1500 µL
		DNA Ligase	60 µL	230 µL
		2X HiFi-Methyl PCR Master Mix	720 µL	2×1600 µL
	/	Nuclease Free Water	2.5 mL	8 mL
		TE Solution	1 mL	4 mL
Box2	/	NadPrep SP Beads	4 mL	15 mL

BS 转化模块

包装编号	管盖颜色	组分名称	包装体积 1002701 (24 rxn)	包装体积 1002702 (96 rxn)
包装编号	管盖颜色	组分名称	包装体积 1002701 (24 rxn)	包装体积 1002702 (96 rxn)
Box 1	/	Bisulfite Diluent	4.5 mL	9 mL
		Bisulfite Mix	4×1 管	8×1 管
		Desulf Buffer	1.8 mL	7.5 mL
Box 2	/	Nuclease Free Water	2.5 mL	8 mL
	/	Bisulfite Beads	4.8 mL	3×6.2 mL
		DNA Protect Buffer	100 μL	380 μL

甲基化单端接头模块 (for MGI)

管盖颜色	组分名称	包装体积 1003631 (24 rxn)	包装体积 1003632 (96 rxn)	包装体积 1003633 (96 rxn)
	NadPrep M-Index (SI) Primer Mix #	12×15 µL	24×25 µL	24×25 µL
	NadPrep Methyl M-Adapter	60 µL	230 µL	230 µL

甲基化双端唯一接头模块 (for MGI)

管盖颜色

组分名称

包装体积
1003740 (24 rxn)

包装体积
1003741 (96 rxn)

包装体积
1003742 (96 rxn)

包装体积

1003743（96 rxn）

包装体积

1003744（96 rxn）

NadPrep M-Index (MDI) Primer Mix #

12×15 µL

24×25 µL

NadPrep Methyl M-Adapter

60 µL

230 µL

甲基化截短型双端唯一标签接头模块

管盖颜色	组分名称	包装体积 1003371 (24 rxn)	包装体积 1003381 (96 rxn)	包装体积 1003382 (96 rxn)
	NadPrep Universal UDI-Index Primer Mix #	12×15 µL	24×25 µL	24×25 µL
	NadPrep Methyl Stubby Adapter	60 µL	230 µL	230 µL
	NadPrep Amplification Primer Mix II	20 µL	75 µL	75 µL

封阻序列

管/瓶盖颜色

名称

包装体积

1106102 (16 rxn)

包装体积

1106101 (96 rxn)

μCaler^®NanoBlockers (for Illumina^®)

40 μL

210 μL

杂交捕获试剂

包装编号	管/瓶盖颜色	名称	包装体积 1105202 (16 rxn)	包装体积 1105201 (96 rxn)
包装编号	管/瓶盖颜色	名称	包装体积 1105202 (16 rxn)	包装体积 1105201 (96 rxn)
Box 1		μHyb #1	840 μL	3×1700 μL
		μHyb #2	130 μL	790 μL
		Human Cot DNA	45 μL	260 μL
		μEnhancer	1300 μL	5×1600 μL
Box 2		Streptavidin Beads	480 μL	2.9 mL
	/	Wash Buffer A Pro	2×5.8 mL	3×23 mL
	/	Wash Buffer B	2.9 mL	20 mL

类别	产品	详情	货号
甲基化建库模块	NadPrep® Methyl Library Preparation Module, 24 rxn	24 rxn	1002501
甲基化建库模块	NadPrep® Methyl Library Preparation Module, 96 rxn	96 rxn	1002502
BS 转化模块	NadPrep® DNA Methyl Bisulfite Conversion Module, 24 rxn	24 rxn	1002701
BS 转化模块	NadPrep® DNA Methyl Bisulfite Conversion Module, 96 rxn	96 rxn	1002702
甲基化截短型双端唯一接头模块	NadPrep® Methyl Stubby Adpater (UDI) Module Set A1 (with 10 nt Index), 24 rxn	UDI 1-12	1003371
	NadPrep® Methyl Stubby Adpater (UDI) Module Set B1 (with 10 nt Index), 96 rxn	UDI 1-24	1003381
	NadPrep® Methyl Stubby Adpater (UDI) Module Set B2 (with 10 nt Index), 96 rxn	UDI 25-48	1003382
封阻序列	μCaler® NanoBlockers (for Illumina®), 16 rxn	16 rxn	1106102
封阻序列	μCaler® NanoBlockers (for Illumina®), 96 rxn	96 rxn	1106101
杂交试剂	μCaler® Hybrid Capture Reagents v2, 16 rxn	16 rxn	1105202
杂交试剂	μCaler® Hybrid Capture Reagents v2, 96 rxn	96 rxn	1105201