01 背景
随着高通量测序 (Next-Generation Sequencing, NGS) 技术的不断进步及广泛应用新,科研和临床应用实践对实验流程的自动化、稳定性、高效性和安全性提出了更高要求。传统手工操作 NGS 流程存在多种困境,如:步骤繁琐、操作复杂、人员专业性要求高、单次操作通量低以及开放的操作环境具有交叉污染的风险等。因此,越来越多的实验室迫切需要一种全新的、更高自动化水平的 NGS 工作站,以延长无人值守时间,释放人力及时间成本。纳昂达 NadAuto-16R 全自动 NGS 工作站应运而生,结合丰富的 NGS 试剂开发及使用经验,更好地满足繁复的 NGS 全流程对于自动化的需求。
NadAuto-16R 全自动 NGS 工作站的推出源于对 NGS 全流程湿实验的深刻理解和对实验操作挑战的洞察,是纳昂达专为 NGS 领域研发设计的一款全自动工作站,旨在提供更高效、更精准的实验工具,满足市场对高通量、高质量实验的需求。
NadAuto-16R 全自动 NGS 工作站的推出不仅提高了实验操作的标准化水平,而且提升了实验流程的工作效率,同时显著减少了人为操作引入的误差。NadAuto-16R 致力于为科研人员提供一种更智能、更可靠的实验解决方案,助力他们在 NGS 领域取得更为显著的成就。
图 1. NadAuto-16R 全自动 NGS 工作站
02 NadAuto-16R 产品简介
NadAuto-16R 全自动 NGS 工作站由主机、终端一体机和控制软件组成,主机由三维机械臂、移液模块、温控模块、热循环模块、加热振荡模块、主机架组成。主机内置 12 个标准 SBS 板位,功能模块、适配器和耗材可自由组合,以应对多种场景、多种反应的需求;搭配 8 通道移液模块和移板抓手,支持加载 1/8 个吸头,可根据样本数量灵活搭配,效率更高,也能轻松实现转板功能。
图 2. NadAuto-16R 动态台面布局示例
NadAuto-16R 全自动 NGS 工作站除用于临床检验前的样本自动加样,包括样本分装、核酸提取、酶反应体系构建、核酸纯化、定量点板和样本混合的加样处理外,还可用于临床诊断方面执行基因测序文库自动化构建和杂交捕获,可全面提升实验室的工作效率。
图 3. NadAuto-16R 应用场景
03 NadAuto-16R 产品特点
紧凑小巧
桌面占用空间少于 1 m3,轻松适应有限空间;
终端一体机与主机高度整合,节省安装和操作空间;
灵活集成
无缝集成温控模块、加热振荡模块、热循环模块的动态台面,支持自由配置;
高通量工作台,延长无人值守时间;
多功能集成模块打造专业级 NGS 自动化工作系统,减少人为因素的干扰;
灵活加载 1/8 个吸头,精准移液,满足不同移液需求,提高移液效率;
简单易用
三维运动模块搭配 8 通道移液头和移板抓手,预置多条传输轨道,轻松应对移液和转板;
高清大尺寸液晶显示屏,灵活触控响应快,一键启动/暂停/重启流程,延续工作流程;
图形化流程编辑,引导式操作,拖拽式程序模块,零门槛可视化编程,人机交互更友好;
预设 NGS 文库构建和杂交捕获等常规应用程序,即买即用,同时支持个性化定制和自主脚本开发;
安全可靠
标配 HEPA 高效过滤系统和紫外灯,时刻保障环境清洁;
基于无液路的空气置换式移液原理,有效清除气溶胶污染;
状态指示灯带实时提示运行状态,避免出现硬件故障和软件错误造成长时间的停机;
多级权限管理,根据不同用户设置操作权限等级,保证数据安全;
设置紧急暂停按扭,实现一键急停,确保人机安全;
04 一站式全自动 NGS 整体解决方案
NadAuto-16R 全自动 NGS 工作站适配纳昂达全系列文库构建和杂交捕获试剂。基于仪器内置应用,可实现预文库构建单轮最大 16 个样本的通量以及杂交捕获单轮最大 8 个样本的通量。除试剂准备和文库质检外,基本实现湿实验全自动操作,延长无人值守时间以提高工作效率。
图 4. NadAuto-16R 预文库构建和快速杂交捕获全流程
4.1 实验方案
在 NadAuto-16R 全自动 NGS 工作站进行自动化操作,自动化流程使用仪器内置应用。手工操作均按照产品使用说明书进行。
预文库构建:人类基因组 DNA 标准品 (Promega, G1471) 分别利用 NadPrep® DNA Library Preparation
Kit (for Illumina®) 和 NadPrep® EZ DNA Library
Preparation Module v2 搭配 NadPrep® Universal Stubby
Adapter (UDI) Module 进行预文库构建,每批次 8 个样本。
杂交捕获:500 ng 预文库投入杂交,以 LungCancer Panel v1.0 和 NadPrep® ES Hybrid
Capture Reagents 完成杂交捕获 (杂交 1
hr)。每批次 8 个样本。选取 1 Gb 数据用于分析。
表 1. NadAuto-16R 应用示例适配试剂
4.2 应用表现
4.2.1
8 样本超声片段化建库表现
分别投入超声片段化后的 50 ng 和 100 ng 人类基因组 DNA 标准品 (Promega,
G1471) 进行 6 批次文库构建,建库结果显示,文库产量在不同批次之间表现出较好的稳定性,平均文库产出达到 1192.9 ng ~ 1,409.6 ng (图 5.A),CV 值 (%) 保持在 2.826 ~
4.650。此外,在每批次文库构建后,我们随机选择了 2 个文库进行 Qseq 质检 (图 5.B),结果显示文库的插入片段分布均在预期范围内,与试剂盒使用说明书推荐参数一致。
图 5. 应用超声片段化文库构建在 NadAuto-16R 全自动 NGS 工作站的多批次全基因组文库产出及片段分布。A. 文库产量; B.文库插入片段。利用 NadPrep® DNA Library Preparation Kit (for Illumina®) 搭配 NadPrep® Universal Stubby Adapter (UDI) Module 进行预文库构建。
4.2.2
8 样本酶切片段化建库表现
6 批次建库结果显示,文库产量在不同批次之间表现出较好的稳定性,平均文库产出达到 1473.6 ng ~ 1,848 ng (图 6.A),CV 值 (%) 保持在 3.068 ~
6.566。此外,在每批次文库构建后,我们随机选择了 2 个文库进行 Qseq 质检 (图 6.B),结果显示文库的插入片段分布均在预期范围内,与试剂盒使用说明书推荐参数一致。
图 6. 应用酶切片段化文库构建在 NadAuto-16R 全自动 NGS 工作站的多批次全基因组文库产出及片段分布。A. 文库产量;B. 文库插入片段。利用 NadPrep® DNA EZ DNA Library Preparation Module v2 搭配 NadPrep® Universal Stubby Adapter (UDI) Module 进行预文库构建。
4.2.3
8 样本快速杂交捕获表现
两批次捕获数据的平均比对率 (Mappability) 达到了 95% 以上,呈现出良好的重复率,中靶率保持在 72% 以上,满足质检要求 (图 7.A)。此外,靶区域的 0.2x mean 达到 99%,0.5x mean 达到 95%,Fold 80 也良好地控制在了 1.4 以下,显示出优秀的覆盖均一性 (图 7.B)。从图 8. 中可以看到,两批次的杂交捕获中,共 16 个反应均未表现出明显的 GC 偏好性。
图 7. NadAuto-16R 全自动 NGS 工作站的多批次杂交捕获表现。A. Q30、比对率、中靶率及重复率;B. 靶区域覆盖均一性。利用 NadPrep® EZ DNA Library
Preparation Module v2 搭配 NadPrep® Universal Stubby
Adapter (UDI) Module 进行预文库构建。500 ng 预文库投入,以 LungCancer Panel v1.0 和 NadPrep® ES Hybrid
Capture Reagents 完成杂交捕获 (杂交 1
hr)。
图 8. NadAuto-16R 全自动 NGS 工作站的多批次杂交捕获 GC 偏好性。 A.第一批次; B.第二批次。
4.2.4
NadAuto-16R vs. 手动操作
此外,我们比较了自动化操作和手工操作的捕获数据表现,图 9. 结果显示,在相同的实验条件和参数下,两者在比对率、中靶率、靶区域的覆盖度方面均无显著差异。
图 9. NadAuto-16R 全自动 NGS 工作站与手工操作的捕获表现对比。A. 比对率及中靶率; B.靶区域覆盖度。