病原靶向测序 tNGS 检测针对核酸提取需要满足哪些要求？

核酸提取的质量是决定高通量测序检测成功的关键，不同的操作实验室都应建立完整的核酸提取流程。首先要对选取的核酸提取试剂盒进行验证，以确保核酸提取的效率及完整性，并对每次提取的核酸样本进行定量检测，以确保核酸满足后续实验要求，同时建立合格核酸样本的标准。

核酸质量验证：

(1) 高质量的 DNA A₂₆₀/A₂₈₀ 应在 1.7~1.9，A₂₆₀/A₂₃₀ 应 > 2，可用 1% 琼脂糖凝胶电泳验证 DNA 的质量 (无杂带、无拖尾、背景无蛋白污染)。

(2) DNA 完整性 (如 Agilent 2100 Bioanalyzer) 检测，如果大部分片段在 200 nt (血浆游离 DNA 除外，140 nt) 以下说明 DNA 降解严重，需重提。

(3) 高质量的 RNA A₂₆₀/A₂₈₀ 应在 1.8~2.0，A₂₆₀/A₂₃₀ 应 > 2。

(4) 微量的核酸采用 Qubit 荧光染料法进行定量测定。

综上，在临床样本采集时确保足量的的样本进行核酸提取，以获得更高丰度的核酸样本；tNGS 构建的文库中含有的病原微生物的丰度越高，则 tNGS 检测LOD 更低，低载量病原微生物也能够高效检出。

主要信息来源于《高通量测序技术在分枝杆菌病诊断中的应用专家共识》和《高通量宏基因组测序技术检测病原微生物的临床应用规范化专家共识》。