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完整标题:使用 μCaler® DNA Full Screen System 进行的 MSRE 反应不完全的可能原因有哪些?该怎么解决?
可能原因 解决方案
样本存在反应抑制剂 (如 EDTA、高 pH 值等) 对样本进行纯化后再进行试验
试剂保存不当 试剂总量较大时,建议分装使用,避免反复冻融

完整标题:使用 μCaler® DNA Full Screen System 杂交捕获后文库产出过高的可能原因有哪些?该怎么解决?
可能原因 解决方案
起始投入量过高 建议使用 Qubit™ 3.0 进行定量
扩增循环数偏高 根据操作指南推荐方案摸索最佳扩增循环数
洗脱过程未按照操作指南进行,导致脱靶严重 洗脱过程严格按照操作指南要求进行操作
完整标题:使用 μCaler® DNA Full Screen System 杂交捕获后文库产出过低的可能原因有哪些?该怎么解决?
可能原因 解决方案
起始投入量不准确 实际起始投入量偏低,建议使用 qPCR 进行精确定量
转管时未将反应液全部转出 转管时务必将每一步的溶液全部转移至新的反应管
杂交以及磁珠纯化过程丢弃部分磁珠 洗脱过程操作避免过于剧烈,弃上清过程切勿丢失磁珠
完整标题:使用 μCaler® DNA Full Screen System 杂交捕获后中靶率低的可能原因有哪些?该怎么解决?
可能原因 解决方案
洗脱过程产生大量气泡 移液器使用时需轻柔吹吸混匀,避免进入空气;若产生气泡,可先用移液器将液面上方气泡吸干净后再弃上清
未更换 PCR 管盖 严格按照说明书要求更换 PCR 管以及管盖
试剂未完全混匀 试剂使用前严格按照操作指南要求进行混匀,并置于相应的温度预热
完整标题:使用μCaler® AML MRD杂交捕获后文库产出过高的可能原因有哪些?该怎么解决
可能原因 解决方案
起始投入量过高 建议使用 Qubit™ 3.0 进行定量
扩增循环数偏高 根据操作指南推荐方案摸索最佳扩增循环数
洗脱过程未按照操作指南进行,导致脱靶严重 洗脱过程严格按照操作指南要求进行操作
完整标题:使用μCaler® AML MRD杂交捕获后文库产出过低的可能原因有哪些?该怎么解决
可能原因 解决方案
起始投入量不准确 实际起始投入量偏低,建议使用 qPCR 进行精确定量
转管时未将反应液全部转出 转管时务必将每一步的溶液全部转移至新的反应管
杂交以及磁珠纯化过程丢弃部分磁珠 洗脱过程操作避免过于剧烈,弃上清过程切勿丢失磁珠
完整标题:使用μCaler® AML MRD杂交捕获后中靶率低的可能原因有哪些?该怎么解决
可能原因 解决方案
洗脱过程产生大量气泡 移液器使用时需轻柔吹吸混匀,避免进入空气;若产生气泡,可先用移液器将液面上方气泡吸干净后再弃上清
未更换 PCR 管盖 严格按照说明书要求更换 PCR 管以及管盖
试剂未完全混匀 试剂使用前严格按照操作指南要求进行混匀,并置于相应的温度预热
完整标题:使用μCaler® AML MRD酶切后产物片段偏大的可能原因有哪些?该怎么解决?
可能原因 解决方案
NEM Fragment Enzyme Mix 使用以及保存不当 NEM Fragment Enzyme Mix 使用前分装保存,冰盒拿取,避免存放在温度波动较大之处。若该组分存放时间较长导致切割效率降低,可将片段化时间延长 5 min。
完整标题:使用μCaler® AML MRD酶切后产物浓度偏低的可能原因有哪些?该怎么解决?
可能原因 解决方案
片段化 DNA 投入量过低 酶切产物回收效率在 10% 左右,为保证有足够的酶切产物进行建库,可将足量的原始样本分多管同时进行酶切
完整标题:使用 μCaler® 杂交捕获后文库产出过高的可能原因有哪些?该怎么解决?

可能原因

解决方案

起始投入量过量

建议使用 Qubit™ 3.0 进行定量

扩增循环数偏高

根据操作指南推荐摸索最佳扩增循环数

洗脱过程未按照操作指南进行,导致脱靶严重

洗脱过程严格按照操作指南要求进行操作