接头比例过高会导致接头或接头二聚体残留;接头比例若不足则会影响连接效率进而降低文库产量。接头使用还应注意保存方式、稀释方法和稀释浓度:
• 保存:避免反复冻融,如欲多次使用,应提前分装;
• 稀释液:推荐使用试剂盒内TE Solution进行接头的稀释,但稀释液不建议长期保存;
• 稀释用量:根据样本起始投入量、片段大小,计算合适的接头与DNA片段摩尔比,可达最佳产量。
• 实验操作:保持连接反应在冰上进行,接头与连接体系分别加入,避免提前自连。
• 不同的接头类型应用推荐如下表:
应用 |
推荐NadPrep接头 |
可选NadPrep接头 |
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全基因组、宏基因组、液相杂交靶向捕获测序 |
Universal Adapter (SI/DI) Module |
BMI Adapter (SI/DI) Module |
RNA测序 |
BMI Adapter (SI/DI) Module |
Universal Adapter (SI/DI) Module |
低频突变检测(~1%或以下突变频率) |
BMI Adapter (SI/DI) Module |
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