完整标题：双筛适合哪些情况，其损耗及注意事项有哪些？

适用于片段化后 DNA 分布范围较宽且期望得到稳定的数据产出的情况。但获得狭窄峰型也会降低文库丰度，故操作少量样本时应注意损耗。双筛分为片段化后双筛、连接后双筛两种。在双筛的过程中短片段损失更多但分布更集中，而长片段与之相反。由于连接后双筛时已引入了接头，因此相对片段化后双筛损失更少，但峰型相对较宽。此时还应注意：

•  任意形式的双筛都会带来 DNA 的损耗，因此扩增循环数需要至少增加 1 个循环；

•  任意形式的双筛都会带来原始文库丰度的损耗，可能会导致测序数据中的重复率的增加；

•  打断片段的平均大小应接近预期片段大小，以减少样本损失。

完整标题：如何提高回收效率? 推荐以下操作以提高回收效率：适当增加孵育时间；适当提高磁珠纯化倍数（如纯化样本步骤，非片筛）；使用新鲜配制的 80% 乙醇。

完整标题：gDNA 建库是否支持 PCR-Free 文库构建及其注意事项？ 支持。但仅适配于全长型接头，即 NadPrep^® DNA 通用型文库构建试剂盒（for Illumina^®）搭配全长 NadPrep^® UDI Adapter 进行文库构建。

完整标题：cfDNA 建库是否支持 PCR-Free 文库构建及其注意事项？ 不支持。

完整标题：文库构建结果出现峰型异常的原因及解决办法？

文库长度分布可通过凝胶电泳、Bioanalyzer或者 Bioptic（Qsep）等生物分析系统进行检测，但应注意不同分析仪器的文库片段读数可能会存在一定的偏差。常见的异常文库片段分布原因如下：

异常峰型	产生原因	解决办法
有短片段（~100 bp）小峰	接头冗余	合适的Input DNA量和接头使用量；注意加样及连接条件
有双峰（额外单个短片段峰）	过度扩增	降低Input DNA量，降低扩增循环数
额外有长片段峰	磁珠残留	纯化步骤时小心操作，以去除全部磁珠

完整标题：吸取部分试剂时，移液器吸头上有溶液残留，如何解决？ 试剂盒内 Ligation Buffer、 DNA Ligase、End Repair & A-Tailing Enzyme 等试剂较为黏稠，建议上下颠倒或反复轻弹融解混匀。操作过程中使用低吸附吸头，缓慢平稳吸取与释放。如吸头有试剂残留可反复吹吸或使用反向移液法，务必确保加液的准确性。