NadPrep® 血浆游离 DNA 双端分子标签文库构建试剂盒对 cfDNA 样本的定量及片段质检,建议如下:
类别 |
要求 |
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提取试剂盒推荐 |
cfDNA |
QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit(Qiagen;货号:55114) |
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溶剂 |
推荐使用无核酸酶水、0.1 × TE(low TE)、10 mM Tris-HCl(pH 8.0~8.5)或提取试剂盒配备的Buffer溶解DNA样品。酶切片段化试剂多对EDTA浓度敏感,应避免使用含EDTA的溶剂溶解。如有必要可进行1.8-2.0 ×磁珠纯化去除。 |
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定量 |
基于分光光度计原理的NanoDrop和基于双链DNA荧光染料的Qubit®、PicoGreen®进行定量。 |
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纯度 |
OD260/OD280=1.8-2.0;OD260/OD230=2.0-2.5。OD260/OD280>1.9表明有 RNA 污染,<1.6表明有蛋白质、酚等污染;OD260/OD230<2.0,则表明有碳水化合物、盐类或者有机溶剂污染。 |
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片段分布 |
cfDNA |
Bioanalyzer或Bioptic(Qsep)分析主峰~160 bp,次峰~320 bp。 |