NadPrep® 快速 RNA 文库构建试剂盒

产品特色

覆盖广

● 广泛支持 2.5-500 ng 起始投入量范围
● 兼容不同质量等级的多类型样本
● 常规性或链特异性文库制备方案灵活选择
● 多类型接头适配主流高通量测序平台
● 无缝衔接上下游模块全面覆盖多场景应用

性能优

● 更高效的文库产出
● 更均一的转录本覆盖
● 更高的检测灵敏度 (低丰度转录本和融合基因)
● 更高的链特异性
● 出色的文库复杂性

流程快

● cDNA 二链合成、末端修复和加 A 合并为一步

● 集成化流程，操作便捷，显著缩短建库时长

实验流程

产品表现

稳定高效的文库产出

I. 兼容广泛的投入量范围

图 1. NadPrep® 快速 RNA 文库构建试剂盒对不同起始投入量细胞系 RNA 样本的建库产出。不同起始投入量 RNA 样本利用 NadPrep® EZ RNA Library Preparation Module 分别搭配 NadPrep® Universal Stubby Adapter (UDI) Module (NovaSeq) 和 NadPrep® Universal Adapter (MDI) Module (for MGI) (DNBSEQ) 构建常规性文库，扩增循环数参考相应说明书。A. 未去除 rRNA (衔接下游 RNACap)；B. 去除 rRNA [衔接上游 rRNA 快速封阻：NadPrep® rRNA Blocking Reagent (Human)]。

注：样本为 Human Brain Total RNA (Takara, 636530)。

II. 支持不同质量等级的多类型样本

图 2. NadPrep® 快速 RNA 文库构建试剂盒对不同质量等级的 RNA 样本的建库产出。50 ng 不同质量等级的 RNA 样本利用 NadPrep® EZ RNA Library Preparation Kit 构建常规性文库。A. 未去除 rRNA；B. 去除 rRNA。
注：样本分级标准 | Grade A (细胞系 RNA): Human Brain Total RNA (Takara, 636530)，RIN ≥ 7；Grade C (FFPE 来源 RNA)：DV₂₀₀ ≥ 50；Grade E (FFPE 来源 RNA)：DV₂₀₀ < 50。

III. 更高效的文库产出

图 3. NadPrep® 快速 RNA 文库构建试剂盒较 Vendor A & B 具有更高效的文库产出。50 ng 不同质量等级的 RNA 样本分别利用 NadPrep® EZ RNA Library Preparation Module (NadPrep)、Vendor A 和 Vendor B 搭配 NadPrep® Universal Stubby Adapter (UDI) Module 构建常规性文库。A. 未去除 rRNA；B. 去除 rRNA。

更均匀的转录本覆盖

图 4. NadPrep® 快速 RNA 文库构建试剂盒较 Vendor A & B 具有更均匀的转录本覆盖。RNA 样本分别利用 NadPrep、Vendor A 和 Vendor B 搭配 NadPrep® Universal Stubby Adapter (UDI) Module 分别衔接上游 A. rRNA 快速封阻模块和 B. 富集 mRNA，以及下游 C. RNACap (500 ng/预文库投入杂交，以 NanOnco Plus Panel v2.0 和 NadPrep® Hybrid Capture Reagents 完成捕获) 构建常规性文库的转录本覆盖度。测序模式为 NovaSeq 6000，PE150，每个样本随机选取 0.3 Gb 用于数据分析。
注：图 A & C 起始投入量均为 50 ng Total RNA，图 A 样本为 Grade A (细胞系 RNA)；图 B 起始投入量为 10 ng，样本为细胞系 mRNA。

更高的检测灵敏度

图 5. NadPrep® 快速 RNA 文库构建试剂盒较 Vendor A & B 对低丰度转录本具有更出色的检出率。50 ng 细胞系 RNA 样本加入 1 μL ERCC (1:1000) 分别利用 NadPrep、Vendor A 和 Vendor B 搭配 NadPrep® Universal Stubby Adapter (UDI) Module 构建预文库 (常规性)，500 ng/预文库投入杂交，以 Ext-RNA Control Panel v1.0 和 NadPrep® Hybrid Capture Reagents 完成捕获。A. ERCC 检出数；B. ERCC 表达量。

图 6. NadPrep® 快速 RNA 文库构建试剂盒较 Vendor A & B 对标准品中融合基因具有更高的检测灵敏度。100 ng FFPE RNA 样本 (Grade C) 混合 3.125% 肿瘤融合多位点 FFPE (DNA/RNA) 标准品分别利用 NadPrep、Vendor A 和 Vendor B 搭配 NadPrep® Universal Stubby Adapter (UDI) Module 构建预文库 (常规性)，500 ng/预文库投入杂交，以 OncoFu Elite (for RNA) Panel v1.0 和 NadPrep® Hybrid Capture Reagents 完成捕获。
注：标准品为 Onco Fusion Multiplex FFPE(DNA/RNA) Reference Standard (GeneWell, GW-RPSM1006)。

更高的链特异性

图 7. NadPrep® 快速 RNA 文库构建试剂盒较 Vendor C 对不同质量等级的 RNA 样本具有较高的链特异性。RNA 样本分别利用 NadPrep、Vendor B 和 Vendor C 搭配 NadPrep® Universal Stubby Adapter (UDI) Module 分别衔接上游 A. rRNA 快速封阻模块和 B. 富集 mRNA 富集，以及下游 C. RNACap (500 ng/预文库投入杂交，以 NanOnco Plus Panel v2.0 和 NadPrep® Hybrid Capture Reagents 完成捕获)构建链特异性文库的链特异性百分比。
注：图 A & C 起始投入量均为 50 ng Total RNA，图 A 样本为 Grade A (细胞系 RNA)；图 B 起始投入量为 5 ng，样本为细胞系 mRNA。

无缝衔接上下游模块，全面覆盖多场景应用

I. 衔接 RNACap

图 8. NadPrep® 快速 RNA 文库构建试剂盒衔接下游 RNACap 构建测序文库的表现。不同起始投入量细胞系 RNA 样本利用 NadPrep® EZ RNA Library Preparation Module 搭配 NadPrep® Universal Adapter (MDI) Module (for MGI) 构建预文库 (链特异性)，500 ng/预文库投入杂交，以 NanOnco Plus Panel v2.0 和 NadPrep® Hybrid Capture Reagents 完成捕获。A. rRNA 占比；B. 基因检出个数。测序模式为 DNBSEQ-T7，PE150，每个样本随机选取 0.3 Gb 用于数据分析。

II. 衔接 rRNA 快速封阻

图 9. NadPrep® 快速 RNA 文库构建试剂盒衔接上游 rRNA 快速封阻构建测序文库的表现。A. rRNA 占比；B. 基因检出个数。

本产品仅限研究使用，不用于临床诊断。

建库模块

包装编号	管盖颜色	组分名称	包装体积 1002441 (24 rxn)	包装体积 1002442 (96 rxn)
Box1		Random Primer II	30 µL	115 µL
		1^st Strand Buﬀer	120 µL	460 µL
		1^st Strand Buﬀer (stranded)	120 µL	460 µL
		1^st Strand Enzyme	60 µL	230 µL
		2^nd Strand & EA Buﬀer	750 µL	2×1500 µL
		2^nd Strand & EA Buﬀer (with dUTP)	750 µL	2×1500 µL
		2^nd Strand & EA Enzyme	120 µL	460 µL
		Ligation Buffer	750 µL	2×1500 µL
		DNA Ligase	65 µL	250 µL
		2X HiFi PCR Master Pro Mix	720 µL	2×1600 µL
		TE Solution	1 mL	4 mL
	/	Nuclease Free Water	2.5 mL	8 mL
Box2	/	NadPrep SP Beads	4 mL	15 mL

单端接头模块 (for MGI)

管盖颜色	组分名称	包装体积 1003611 (24 rxn)	包装体积 1003621 (96 rxn)	包装体积 1003622(96 rxn)
	NadPrep M-Index (SI) Primer Mix #	12×15 µL (Tube)	24×25 µL (Tube)	24×25 µL (Tube)
	NadPrep M-Adapter (SI)	60 µL (Tube)	230 µL (Tube)	230 µL (Tube)

管盖颜色	组分名称	包装体积 1003641 (96 rxn)
管盖颜色	组分名称	包装体积 1003641 (96 rxn)
	NadPrep M-Index (SI) Primer Mix #	96×8 µL (Plate)
	NadPrep M-Adapter (SI)	260 µL (Tube)
	NadPrep M-Amplification Primer Mix (for MGI, SI)	75 µL (Tube)

双端唯一接头模块 (for MGI)

管盖颜色	组分名称	包装体积 1003711 (24 rxn)	包装体积 1003721 (96 rxn)	包装体积 1003722 (96 rxn)	包装体积 1003725 (96 rxn)	包装体积 1003726 (96 rxn)
	NadPrep M-Index (MDI) Primer Mix #	12×15 µL (Tube)	24×25 µL (Tube)	24×25 µL (Tube)	24×25 µL (Tube)	24×25 µL (Tube)
	NadPrep M-Adapter (DI)	60 µL (Tube)	230 µL (Tube)	230 µL (Tube)	230 µL (Tube)	230 µL (Tube)

管盖颜色	组分名称	包装体积 1003751 (96 rxn)	包装体积 1003752 (96 rxn)	包装体积 1003753 (96 rxn)	包装体积 1003754 (96 rxn)
管盖颜色	组分名称	包装体积 1003751 (96 rxn)	包装体积 1003752 (96 rxn)	包装体积 1003753 (96 rxn)	包装体积 1003754 (96 rxn)
	NadPrep M-Index (MDI) Primer Mix #	96×8 µL (Plate)	96×8 µL (Plate)	96×8 µL (Plate)	96×8 µL (Plate)
	NadPrep M-Adapter (DI)	260 µL (Tube)	260 µL (Tube)	260 µL (Tube)	260 µL (Tube)
	NadPrep M-Amplification Primer Mix (for MGI, DI)	75 µL (Tube)	75 µL (Tube)	75 µL (Tube)	75 µL (Tube)

管盖颜色	组分名称	包装体积 1003761 (1152 rxn)	包装体积 1003762 (1152 rxn)	包装体积 1003763 (1152 rxn)	包装体积 1003764 (1152 rxn)
管盖颜色	组分名称	包装体积 1003761 (1152 rxn)	包装体积 1003762 (1152 rxn)	包装体积 1003763 (1152 rxn)	包装体积 1003764 (1152 rxn)
	NadPrep M-Index (MDI) Primer Mix #	96×72 µL (Tube)	96×72 µL (Tube)	96×72 µL (Tube)	96×72 µL (Tube)
	NadPrep M-Adapter (DI)	2×1350 µL (Tube)	2×1350 µL (Tube)	2×1350 µL (Tube)	2×1350 µL (Tube)
	NadPrep M-Amplification Primer Mix (for MGI, DI)	900 µL (Tube)	900 µL (Tube)	900 µL (Tube)	900 µL (Tube)

通用截短型双端唯一接头模块（for Illumina）

管盖颜色	组分名称	包装体积 1003240 (24 rxn)	包装体积 1003241 (96 rxn)	包装体积 1003242 (96 rxn)
	NadPrep Universal UDI-index Primer Mix #	12×15 µL (Tube)	24×25 µL (Tube)	24×25 µL (Tube)
	NadPrep Universal Stubby Adapter	60 µL (Tube)	230 µL (Tube)	230 µL (Tube)
	NadPrep Amplification Primer Mix II	20 µL (Tube)	75 µL (Tube)	75 µL (Tube)

管盖颜色	组分名称	包装体积 1003251 (96 rxn)	包装体积 1003252 (96 rxn)	包装体积 1003253 (96 rxn)	包装体积 1003254 (96 rxn)	包装体积 1003255 (96 rxn)	包装体积 1003256 (96 rxn)	包装体积 1003257 (96 rxn)	包装体积 1003258 (96 rxn)
管盖颜色	组分名称	包装体积 1003251 (96 rxn)	包装体积 1003252 (96 rxn)	包装体积 1003253 (96 rxn)	包装体积 1003254 (96 rxn)	包装体积 1003255 (96 rxn)	包装体积 1003256 (96 rxn)	包装体积 1003257 (96 rxn)	包装体积 1003258 (96 rxn)
	NadPrep Universal UDI-index Primer Mix #	96×8 µL (Plate)	96×8 µL (Plate)	96×8 µL (Plate)	96×8 µL (Plate)	96×8 µL (Plate)	96×8 µL (Plate)	96×8 µL (Plate)	96×8 µL (Plate)
	NadPrep Universal Stubby Adapter	260 µL (Tube)	260 µL (Tube)	260 µL (Tube)	260 µL (Tube)	260 µL (Tube)	260 µL (Tube)	260 µL (Tube)	260 µL (Tube)
	NadPrep Amplification Primer Mix II	75 µL (Tube)	75 µL (Tube)	75 µL (Tube)	75 µL (Tube)	75 µL (Tube)	75 µL (Tube)	75 µL (Tube)	75 µL (Tube)

管盖颜色	组分名称	包装体积 1003261 (1152 rxn)	包装体积 1003262 (1152 rxn)	包装体积 1003263 (1152 rxn)	包装体积 1003264 (1152 rxn)
管盖颜色	组分名称	包装体积 1003261 (1152 rxn)	包装体积 1003262 (1152 rxn)	包装体积 1003263 (1152 rxn)	包装体积 1003264 (1152 rxn)
	NadPrep Universal UDI-index Primer Mix #	96×72 µL (Tube)	96×72 µL (Tube)	96×72 µL (Tube)	96×72 µL (Tube)
	NadPrep Universal Stubby Adapter	2×1350 µL (Tube)	2×1350 µL (Tube)	2×1350 µL (Tube)	2×1350 µL (Tube)
	NadPrep Amplification Primer Mix II	900 µL (Tube)	900 µL (Tube)	900 µL (Tube)	900 µL (Tube)

本产品仅限研究使用，不用于临床诊断。

NadPrep® 快速 RNA 文库构建试剂盒分为常规性文库和链特异性文库，两者有什么区别？

完整标题：NadPrep® 快速 RNA 文库构建试剂盒分为常规性文库和链特异性文库，两者有什么区别？

转录组测序 (RNA-Seq) 文库制备一般分为常规性和链特异性两类，其核心差异在于是否在测序文库中保留转录本的方向性信息。其中，链特异性文库在制备过程中保留了转录本的方向性，测序与下游分析时可判定转录本来源于 DNA 的正义链还是反义链；而常规性文库在 cDNA 合成过程中会丢失方向性信息，测序数据无法直接区分转录方向。与常规性 RNA-Seq 相比，链特异性 RNA-Seq 更能准确地统计转录本数量，明确基因结构，同时识别反义转录本以及发现更多新转录本，因此是研究基因结构与表达调控的重要手段。总体而言，文库制备方法的选择应基于实验目的、成本预算及参考转录组的可用性等因素；若需获取转录本方向性信息，应优先选择链特异性文库。无论选择何种方案，均应严格按照试剂盒使用说明书执行相应操作以确保数据质量。

NadPrep® 快速 RNA 文库构建试剂盒适用于哪些样本类型？

完整标题：NadPrep® 快速 RNA 文库构建试剂盒适用于哪些样本类型？

NadPrep® 快速 RNA 文库构建试剂盒广泛适用于不同质量分级的总 RNA、经 poly(A) 富集的 mRNA、经 rRNA 去除后的 RNA文库制备。需要特别注意的是，不同来源的总 RNA 中 mRNA 含量差异较大，若总 RNA 起始投入量过低，可能无法获得足够的 mRNA 以构建高质量文库。

NadPrep® 快速 RNA 文库构建试剂盒是否适用于降解严重的 FFPE 样本？

完整标题：NadPrep® 快速 RNA 文库构建试剂盒是否适用于降解严重的 FFPE 样本？

NadPrep® 快速 RNA 文库构建试剂盒适用于大多数不同质量等级的细胞、新鲜组织等来源的 RNA 样本。对于片段化程度严重 (DV₂₀₀ < 20) 的 FFPE 组织来源样本，反转录效率可能较低，建议适当增加 PCR 扩增循环数；若利用 FFPE 组织来源的样本进行 RNA 靶向捕获测序时，可适当提高 RNA 起始投入量以提升捕获效率。

使用 NadPrep® 快速 RNA 文库构建试剂盒制备的文库产出偏低的可能原因有哪些？该如何解决？

完整标题：使用 NadPrep® 快速 RNA 文库构建试剂盒制备的文库产出偏低的可能原因有哪些？该如何解决？

RNAase 污染：实验全程应使用 RNase Free 耗材并在无 RNase 污染的环境下操作，否则会影响反转录效率，导致文库产出偏低。

样本纯度低：若 RNA 样本中残留过多的螯合剂、胍盐、苯酚、乙醇等杂质，会抑制反转录酶活性。建议按照使用说明书正文步骤七：扩增产物纯化使用 2X NadPrep® SP Beads 对 RNA 样本进行纯化，注意替换洗脱试剂为 Nuclease Free Water。

样本质量差：对于质量较差的 RNA 样本，建议按照使用说明书推荐适当增加 PCR 扩增循环数。

为何不同质量等级的 RNA 样本在接头连接后需采用不同的分选或纯化方案？

完整标题：为何不同质量等级的 RNA 样本在接头连接后需采用不同的分选或纯化方案？

对于完整度较高的细胞、新鲜组织来源的 RNA (A/B 级) 样本，建议采用方案 I (分选)，以获得更理想的文库片段分布。

对于完整度较低的高度降解的细胞、冻存组织来源的 RNA (D 级)，FFPE 组织来源的 RNA (C/E 级) 样本，建议采用方案 II (纯化)。由于此类 RNA 样本本身片段化严重，直接对连接产物进行纯化可最大限度保留原始信息，减少有效序列的损失。

NadPrep® 快速 RNA 文库构建试剂盒能否衔接不同的上游或下游模块？

完整标题： NadPrep® 快速 RNA 文库构建试剂盒能否衔接不同的上游或下游模块？

可以。NadPrep® 快速 RNA 文库构建试剂盒兼容多种 rRNA 去除模块和 mRNA 富集模块，并可与靶向捕获体系联用。主要衔接建议如下：

1) 衔接 rRNA 去除模块 (推荐)：优先选择对应物种的 NadPrep® rRNA 快速封阻模块，按照使用说明书附录 2：衔接 NadPrep® rRNA快速封阻模块 (推荐) 完成文库制备。可选产品包括：

•NadPrep® rRNA Blocking Reagent (Human) (Cat #1002901/#1002902)

•NadPrep® rRNA Blocking Reagent (Zebrafish) (Cat #1002911/#1002912)

•NadPrep® rRNA Blocking Reagent (HMR) (Cat #1002921/#1002922)

•NadPrep® rRNA Blocking Reagent (Plant) (Cat #1002931/#1002932)

•NadPrep® rRNA Blocking Reagent (Custom) (Cat #10029XX)

2) 衔接 mRNA 富集模块：可灵活选择第三方 mRNA 富集模块。经相应流程处理后的 RNA 样本应使用 Nuclease Free Water 进行洗脱，随后按照使用说明书正文步骤一：RNA 片段化 & 随机引物结合进行文库制备。

3) 衔接靶向 RNA 测序：推荐使用纳昂达液相杂交捕获体系进行靶向捕获，按照相应操作指南 (www.njnad.com) 完成捕获文库构建。

类别	产品	详情	货号
建库模块	NadPrep® EZ RNA Library Preparation Module, 24 rxn	24 rxn	1002441
建库模块	NadPrep® EZ RNA Library Preparation Module, 96 rxn	96 rxn	1002442
单端接头模块 (for MGI)	NadPrep® Universal Adapter (SI) Module Set A1 (for MGI), 24 rxn	SI 1-12	1003611
	NadPrep® Universal Adapter (SI) Module Set E1 (for MGI), 96 rxn	SI 1-96	1003641
	NadPrep® Universal Adapter (SI) Module Set B1 (for MGI), 96 rxn	SI 1-24	1003621
	NadPrep® Universal Adapter (SI) Module Set B2 (for MGI), 96 rxn	SI 25-48	1003622
双端唯一接头模块 (for MGI)	NadPrep® Universal Adapter (MDI) Module Set A1 (for MGI), 24 rxn	MDI 1-12	1003711
	NadPrep® Universal Adapter (MDI) Module Set B1 (for MGI), 96 rxn	MDI 1-24	1003721
	NadPrep® Universal Adapter (MDI) Module Set B2 (for MGI), 96 rxn	MDI 25-48	1003722
	NadPrep® Universal Adapter (MDI) Module Set B3 (for MGI), 96 rxn	MDI 49-72	1003725
	NadPrep® Universal Adapter (MDI) Module Set B4 (for MGI), 96 rxn	MDI 73-96	1003726
	NadPrep® Universal Adapter (MDI) Module Set E1 (for MGI), 96 rxn	MDI 1-96	1003751
	NadPrep® Universal Adapter (MDI) Module Set E2 (for MGI), 96 rxn	MDI 97-192	1003752
	NadPrep® Universal Adapter (MDI) Module Set E3 (for MGI), 96 rxn	MDI 193-288	1003753
	NadPrep® Universal Adapter (MDI) Module Set E4 (for MGI), 96 rxn	MDI 289-384	1003754
	NadPrep® Universal Adapter (MDI) Module Set F1 (for MGI), 1152 rxn	MDI 1-96	1003761
	NadPrep® Universal Adapter (MDI) Module Set F2 (for MGI), 1152 rxn	MDI 97-192	1003762
	NadPrep® Universal Adapter (MDI) Module Set F3 (for MGI), 1152 rxn	MDI 193-288	1003763
	NadPrep® Universal Adapter (MDI) Module Set F4 (for MGI), 1152 rxn	MDI 289-384	1003764
通用截短型双端唯一接头模块	NadPrep® Universal Stubby Adapter (UDI) Module Set A1, 24 rxn	Index 1-12 24 rxn	1003240
	NadPrep® Universal Stubby Adapter (UDI) Module Set B1, 96 rxn	Index 1-24 96 rxn	1003241
	NadPrep® Universal Stubby Adapter (UDI) Module Set B2, 96 rxn	Index 25-48 96 rxn	1003242
	NadPrep® Universal Stubby Adapter (UDI) Module Set E1, 96 rxn	Index 1-96 96 rxn	1003251
	NadPrep® Universal Stubby Adapter (UDI) Module Set E2, 96 rxn	Index 97-192 96 rxn	1003252
	NadPrep® Universal Stubby Adapter (UDI) Module Set E3, 96 rxn	Index 193-288 96 rxn	1003253
	NadPrep® Universal Stubby Adapter (UDI) Module Set E4, 96 rxn	Index 289-384 96 rxn	1003254
	NadPrep® Universal Stubby Adapter (UDI) Module Set E5, 96 rxn	Index 385-480 96 rxn	1003255
	NadPrep® Universal Stubby Adapter (UDI) Module Set E6, 96 rxn	Index 481-576 96 rxn	1003256
	NadPrep® Universal Stubby Adapter (UDI) Module Set E7, 96 rxn	Index 577-672 96 rxn	1003257
	NadPrep® Universal Stubby Adapter (UDI) Module Set E8, 96 rxn	Index 673-768 96 rxn	1003258
	NadPrep® Universal Stubby Adapter (UDI) Module Set F1, 1152 rxn	Index 1-96 1152 rxn	1003261
	NadPrep® Universal Stubby Adapter (UDI) Module Set F2, 1152 rxn	Index 97-192 1152 rxn	1003262
	NadPrep® Universal Stubby Adapter (UDI) Module Set F3, 1152 rxn	Index 193-288 1152 rxn	1003263
	NadPrep® Universal Stubby Adapter (UDI) Module Set F4, 1152 rxn	Index 289-384 1152 rxn	1003264