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产品服务

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提取好的总 RNA 是否有必要进行 rRNA 的去除？有何推荐？
完整标题：提取好的总 RNA 是否有必要进行 rRNA 的去除？有何推荐？

如后续直接测序，建议去除。总RNA逆转录模块可兼容市场上其他rRNA商用试剂盒定向去除，如NEBNext® rRNA Depletion Kit v2（NEB），AnyDeplete Module（NuGen）等。如后续用于靶向捕获则可无需去除。

总 RNA 逆转录模块适用样本范围及具体要求有哪些？
完整标题：总 RNA 逆转录模块适用样本范围及具体要求有哪些？

总 RNA 逆转录模块兼容多种类型样本，包括细胞、组织、FFPE 样本等。对于复杂样本的处理（如 FFPE 组织样本），推荐从源质控。样本应选取合适的提取试剂盒，并进行相应的定量及片段质检，建议如下：

类别

要求

提取试剂盒推荐

细胞系 RNA

AllPrep DNA/RNA Mini Kit（Qiagen；货号，80204）

FFPE RNA

AllPrep DNA/RNA FFPE Kit（Qiagen；货号，80234）

定量

基于分光光度计原理的NanoDrop和基于荧光染料的 Qubit® RNA HS Assay 定量

纯度

OD260/OD280=1.7-2.0。OD260/OD280>2.0 表明有异硫氰酸污染，<1.7 表明有蛋白质等污染

完整性

定量法

RNA IQ（By Qubit™ RNA IQ Assay Kit）＞4

RIN（By Agilent 2100）＞3

DV200（By Agilent 2100；＞200 nt RNA所占比例）＞50%

条带检测法

2%的琼脂糖凝胶电泳或生物分析仪，如 Agilent 2100、Bioptic（Qsep）进行样本完整性评估。


试剂盒中 TE Solution 的具体组分？
完整标题：试剂盒中 TE Solution 的具体组分？

TE Solution的成分为10 mM Tris，0.1 mM EDTA（pH 8.0）。

总 RNA 的双链 DNA 转化效率低的原因？
完整标题：总 RNA 的双链 DNA 转化效率低的原因？ 实验过程中须使用 RNase-free 耗材，操作环境确保无 RNase 污染，否则将严重影响双链 DNA 产量。此外，RNA 样本如含有过多的螯合剂、胍盐、苯酚、乙醇等杂质，也会影响后续的酶反应导致产量下降，建议使用 NadPrep® SP Beads 进行纯化。
该产品是否适用于降解严重的 FFPE 样本？
完整标题：该产品是否适用于降解严重的 FFPE 样本？ 本产品适用于绝大部分不同等级的细胞、组织来源的 RNA，但降解严重（DV 200 < 30%）的 FFPE 组织来源 RNA 样本转化的双链 DNA，其靶向捕获效率将显著降低。使用 FFPE 组织来源的样本进行 RNA 靶向捕获测序时，推荐适度增加 RNA 投入量，以提升靶向捕获效率。
FFPE 组织来源 RNA 的质控分级为何使用 DV 200？
完整标题：FFPE 组织来源 RNA 的质控分级为何使用 DV 200？ 经甲醛固定、石蜡包埋的 FFPE 组织提取的 RNA RIN 值一般较小，多集中在 2.0 左右，而 DV 200 值相差较大，更能反映 RNA 的实际降解程度。因此，推荐 DV 200 作为 FFPE 组织来源 RNA 的质控分级参考。
该产品是否适用总 RNA 建库测序？
完整标题：该产品是否适用总 RNA 建库测序？ 可以。本产品还可搭配 rRNA 去除模块用于去除 rRNA 后测序 (rRNA-depleted RNA-seq) 的文库制备，推荐使用纳昂达 NadPrep® rRNA 快速封阻模块 (NadPrep® rRNA Blocking Regent (Human)，货号 1002901 或 1002902)。 
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